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    不同類型的樣本的處理辦法

    發(fā)布時間: 2017-09-15  點擊次數(shù): 1317次

    一般我們可用于ELISA檢測的樣本是有多種類型的,如血清、血漿、尿液、細胞培育上清或安排勻漿液等,不同類型的檢測樣本前期的處理辦法是不一樣的。正確的處理樣本是確保ELISA檢測的正確性和準確性的*步,下面簡單介紹一下不同類型的樣本的處理辦法。
    1、血清
    血清是zui常用于ELISA檢測的一類樣本,處理也比較簡單。
    用無熱原、無內(nèi)毒素的試管或離心管搜集血液標本,將試管或離心管室溫放置2小時或4℃一個晚上,使血清分出。(將試管或離心管歪斜放置,使液面橫截面增大,能使血清更大程度的分出。)4℃ 1000×g離心20分鐘,細心搜集上清。主張將血清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。
    采血過程中應防止溶血,由于紅細胞裂解時會開釋具有過氧化酶活性的物質,在以HRP為符號的ELISA檢測中會有非特異性的顯色,而導致檢測的不準確性。一起也應防止細菌污染,由于菌體內(nèi)可能含有內(nèi)源性的HRP然后導致檢測的假陽性。
    2、安排勻漿液
    1)將安排樣本用PBS (0.01錨點錨點M, PH 7.4) 沖刷,洗去安排外表殘留的血液或雜質。
    2)將安排塊稱重,記載后剪碎,碎塊應盡量小,便于勻漿得更充沛
    3)將安排按必定的份額參加預冷的PBS(臨用前參加蛋白酶按捺劑)勻漿,勻漿時置于冰上或冰浴中。(一般按安排分量:PBS體積=1:9的份額勻漿,例如1g的安排樣本對應9mL的PBS,詳細體積可根據(jù)試驗需求恰當調(diào)整,檢測后核算樣品濃度時應乘以相應的稀釋倍數(shù))
    4)吸取勻漿液到離心管,4℃ 5000×g 離心5~10min,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。
    3、血漿
    用含抗凝劑的采血管或離心管搜集血液標本,標本搜集后30min內(nèi)4℃ 1000×g離心15min,取上清即血漿。將上清分裝多份,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。防止運用溶血或高血脂的標本。
    常用的抗凝劑為EDTA、肝素鈉和枸櫞酸鈉等,檢測時還應細心閱讀試劑盒說明書,查看試劑盒是否對抗凝劑有特殊要求。
    4、細胞培育上清
    取細胞培育上清到離心管,1000×g離心20min,除掉細胞碎片及雜質,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。
    5、細胞裂解液
    1)吸去培育板內(nèi)的培育基,用胰酶消化細胞,加適量培育基將細胞從培育板上吹下來。懸浮細胞可省掉。
    2)搜集細胞懸液,1000×g離心10min,棄去培育基,用預冷的PBS潤洗3次。
    3)參加適量的預冷PBS或細胞裂解液(臨用前參加蛋白酶按捺劑)重懸細胞。一般6孔板一個孔的細胞量需求150~250μL PBS重懸。
    4)將樣品放入-20℃或-80℃,使樣品冷凍,再放室溫解凍樣品,重復凍融幾回,使細胞充沛裂解。也可將樣品進行超聲破碎,以達到裂解的意圖。
    5)4℃ 10000×g 離心10min,除掉細胞碎片,取上清,-20℃或-80℃保存,防止重復凍融。
    6、尿液、唾液等其他液體生物樣本
    1000×g離心20min,取上清即可檢測。
    總的來說,由于ELISA只能檢測可溶性蛋白的含量,所以應確保一切樣本均為弄清的液體,沉積或懸浮物都應離心去除。
    為了確保檢測的準確性,保存于-20℃或-80℃的樣本在1~6個月內(nèi)檢測;4℃保存的樣本應在1周內(nèi)進行檢測。
     

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